Лабораторная диагностика вирусных инфекций

Оглавление

Вопрос 19. Что такое вирусологический метод диагностики?

Основные методы, используемые для лабораторной диагностики вирусных инфекций, – это иммуноферментный анализ (ИФА), реакция иммунофлюоресценции (РИФ) и полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Материалом для исследования являются биологические жидкости организма – чаще кровь, реже ликвор, слюна или буккальный соскоб, моча, слизь из зева или носа.

https://www.youtube.com/watch?v=ytdeven-GB

При ИФА определяют находящиеся в биологической жидкости суммарные антитела и/или антигены вируса путем связывания их со специфическими антигеном/антителом вируса, сорбированными на твердой фазе и меченными ферментом, с последующим расщеплением хромогена и регистрацией результата. Выявляются как суммарные антитела, так и антитела различных классов (IgM, IgG, IgA). Возможно установление титра антител к возбудителю.

Разновидность ИФА с определением антител к отдельным белкам вируса – иммуноблотинг (ИБ), служит подтверждающим (конфирматорным) тестом для скринингового обследования в ИФА.

При проведении РИФ определяют антигены возбудителя путем связывания их со специфическим антителом, меченным флюоресцентным агентом с последующей детекцией свечения под микроскопом.

Быстрые тесты (экспресс тесты) позволяют выявлять антитела и/или антигены вируса быстро (за 10-30 минут) и без использования специальной лабораторной техники. Они могут быть основаны на разных методах, например, латекс-агглютинации.

ПЦР подразумевает определение нуклеиновых кислот (РНК или ДНК) вируса в биологических жидкостях. Возможна полуколичественная оценка содержания возбудителя в материале и определение его генетических характеристик (генотипа, резистентности к химиопрепаратам).

Кооперация
клеток в иммунном ответе.

Лабораторная диагностика вирусных инфекций

В
формировании иммунного ответа включаются
все звенья иммунной системы- системы
макрофагов, Т- и В- лимфоцитов, комплемента,
интерферонов и главная система
гистосовместимости.

В
кратком виде можно выделить следующие
этапы.

1.
Поглощение Аг макрофагом.

2.
Представление Аг макрофагом Т- хелперам.

3.
Узнавание Аг Т- хелперами и их активация.

https://www.youtube.com/watch?v=ytcopyrighten-GB

4.
Узнавание Аг и активация В- лимфоцитов.

5.
Дифференциация В- лимфоцитов в
плазматические клетки, синтез антител.

6.Аг Ат,
активация систем комплемента и макрофагов,
интерферонов.

7.
Разрушение инфицированных чужеродными
Аг клеток Т- киллерами.

8.
Индукция Т- и В- клеток иммунной памяти,
способных специфически распознавать
Аг и участвовать во вторичном иммунном
ответе ( антигенстимулированные
лимфоциты).

Аллергический
метод. Основан
на выявлении сенсибилизированого
организма с помощью аллерг. проб на
аллергены (туберкулин, бруцеллин,
тулярин, антраксин, грибковые). Кож-ные
пробы (in
vivo)
– Манту (тубик), Бюрне (бруцеллез), in
vitro,
р-ция бласт-трансформации, р-ция тормож.
и миграции лейкоцитов.

Возбудитель гепатита А.семейству
пикорнавирусов, роду энтеровирусов.

Вирус гепатита А
имеет один вирусспецифический антиген
белковой природы. HAV высокая устойчивость
к действию физических и химических
факторов. Патогенез: с пищей попадает
в желудочно-кишечный тракт, где
репродуцируется в эпителиальных клетках
слизистой оболочки тонкой кишки и
регионарных лимфатических узлах.

Затем
возбудитель проникает в кровь, в которой
он обнаруживается в конце инкубационного
периода и в первые дни заболевания,
основной мишенью являются клетки печени,
в цитоплазме которых происходит его
репродукция. После перенесения клинически
выраженной или бессимптомной инфекции
формируется пожизненный гуморальный
иммунитет.

Эпидемиология – источником
инфекции являются больные люди.
Лабораторная диагностика – проводится
путем выявления вируса в фекалиях
больного методом иммуноэлектронной
микроскопии, также обнаружен с помощью
иммуноферментного и радиоиммунного
анализа. Профилактика – испытываются
инактивированная и живая культуральные
вакцины.

https://www.youtube.com/watch?v=https:accounts.google.comServiceLogin

Билет№28

1. Строение и химический состав клеточной
стенки гр , гр-, бактерий. Механизм окраски
по Грамму.

Кл
стенка.
по ее структуре бактерии делятся на ГР-
и ГР . Основу КС всех бакт. составляет
пептидогликан, обеспечив регидность и
эластичность КС. Стр-ра пептидогликана
представлена полисахаридными цепями.
Пептиды У Гр (в осн мукопептидн природы)
Кс имеет 3х-слойное стр-е. У ГР пептидогликан
связан с тейхоев и липотейхоев к-ми,
тейх к-ты пронизыв пептигл или нах-ся
на его пов-ти, липотейх к-ты закреплены
в ЦПМ.

ГР-
она 4х-слойна (3х-слойная мембр ЛПС-природы
и подлежащ слой мукопептида). У ГР-
пептидогл однослоен и покрыт наруж
мембр с мозаичн стр-ем. Наружн мембр
пронизана белками-поринами, они обеспеч
диф-ю хим в-в в кл. В стр-ре КС ГР- имеется
ЛПС, котор облад Ag и токсич св-ми.

КС
у бакт выполн ф-ии: придает форму,
защищает, несет рец, чз нее поступ пит
в-ва. При окраске по Грамму (генциал-виолетом)
спирт явл-ся дифференц в-вом, он вымыв
краску у ГР-.. Гр- пептидогликан тонкий,
лежит глубоко, в нем нет тейхой к-т,
комплекса не образ, бакт обесцвеч
спиртом, затем докраш фуксином розов.
Вымыв красителей способств большие
поры в КС. Удерж окраски способств
многослойн пептидогликан и мелкие поры
в стенке.

Вирус гепатита
С

семейству
Flaviviridae. Содержит 1-нитивая « »РНК, имеет
суперкапсид. Гепатит С чаще протекает
в субклинической форме.Однако у 70%
больных развивается хронический гепатит,
осложняющийся во многих случаях циррозом
печени или гепатомой. Источник инфекции
– человек. Вирус передается так же,

как и вирус гепатита
В парентеральным или половым путем.

Вирус гепатита
Е

Лабораторная диагностика вирусных инфекций

семейству
калицивирусов. Геном представлен
1-нитивая « »РНК. Вирус лишен суперкапсида,
имеет капсид. Заболевание протекает
легче, чем гепатит В и С и характеризуется
умеренным поражением печени. В большинстве
случаев прогноз благоприятный, за
исключением беременных женщин, у которых
заболевание может закончиться летальным
исходом.

Билет№29

грибы вызыв различн остр и хрон инф-ии,
забол-я м.б. в виде перв и втор инф-ий
Чаще всего кандидозы возник у лиц,
длительно принемающ а/б широкого спектра.
При кандидозах накапл-ся IgG,M и A.Эпид-я:
C.albicans явл-ся норм предст микрофлоры
челов, устойч к ф-м внеш ср. Диагн-ка:
1) микроск-ют пат материал для обнаруж
почкующ кл или элем псевдомицелия.

Билет№33

Пневмококки.
Диплококки, вытянутой форма, каждая
пара кокков окружена выраженой капсулой,
растет на кров. средах, обр-ет мелкие
колонии, окружен. неполн зоной гемолиза
Ag:
поверхн. ПС капсульный, ПС Ag-КС, М-протеин
(спос-ть к адгезии) Ф-ра
вир-ти:
гемолизины и ферм (пептидаза, расщепл.IgА,
гиалуронидаза, способств.

Лабораторная диагностика вирусных инфекций

распр-ю
стрепт., подавл.фагоцитоз,) Инфицир-е
слиз. респир тракта происх. при нарушении
их целост-ти. Стрептококки- внекл паразиты
( вызыв.бронхиты,пневмонии,бактериемия,
менингит.) Имм-т малонапряж, носит
типоспециф хар-р. Пневмонии-антропонозн.забол,
перед-ся возд-кап. путем. Стрептококки
вегетируют на слиз. верх. дых. Путем.
Диагн-ка:

б/л иссл-е и биопроба для выдел. чист.культ.с
послед.идентиф-ей.

Билет№35

Реакции,
основанные на феномене агглютинации.

Агглютинация
представляет собой склеивание клеток
или отдельных частичек — носителей
антигена с помощью иммунной сыворотки
к этому антигену.

Реакция
агглютинации

Реакция
пассивной, или непрямой, гемагглютинации
(РПГА, РНГА). В ней используют эритроциты,
на поверхности которых сорбированы
антигены (бактериальные, вирусные,
тканевые). Их агглютинация происходит
при добавлении соответствующих сывороток
или антигенов. Эритроциты, сенсибилизированные
антигенами, называют антигенным
эритроцитарным диагностикумом и
используют для выявления и титрования
антител. Эритроциты, сенсибилизированные
антителами. называют иммуноглобулиновыми
эритроцитарными диагностикумами и
применяют для выявления антигенов.

Реакция
торможения гемагглютинации
(РТГА) основана на феномене предотвращения
(торможении) иммунной сыворотки
гемагглютинации эритроцитов вирусами,
используется для выявления и титрования
противовирусных антител. Если в сыворотке
крови больного есть антитела к вирусу,
то антиген нейтрализуется и агглютинация
эритроцитов не происходит.

Кампилобактерии.
Род Campуlobacter. Инфекционный подъем
заболевания летом и осенью. мольчики в
2 р чаще, преим дети грудн возр.в осн в
виде энтерита.сем Spirilaceae,род campilobacter,вид
C.jejunii,C.pylori-возб язвы 12-перст,гр-пал,тонк,с
чуть заостр концами,спир изогн,сравн с
крыльями чайки.2 жгутика.

треб к усл
культ.микроаэроф,пит ср с доб сывкр или
асцетич жидк,оксидазо ,каталазо ,не ферм
Углев. Факт патог:эндотокс,рец к слиз
тонк и толст-адгез,некот штаммы спос
выд экзотокс(энтеро). Норм обит киш
животн:КРС,свиней,кур,дом жив,собак. Во
внеш ср неуст. Ист исн лоя Ч-инф прод.
Инк пер3-4дня.д/з:1.бактериол-фекалии-посев
прямо у постели-культив-идентиф по
морф,биох и Аг св2. РИФ3.онс-биоктат-видна
морфология. Проф: вакц нет. Леч:а/б

Билет№37

Бактериологич.
метод. Основан
на выделении чист. ку-р и их ID
по культураль., пигмент., Аг, тинкториаль.,
фермент. св-вам.

В 2этапа

1-выдел-е в чист
культ

2-идентификация

1 день-мазок окраска
по Грамму-тинкториальн и морфол св-ва.
Посев на пит среду

2день-описание
культ св-в (высота, величина, цвет, пов-ть,
прозр, края, консистенция),Приготовл
мазка из чист колоний Накопление ч.
культ на скош агаре

3день-описание
хар-ра роста чист культ. Посев на пестр
ряд

Заражение мышей-сосунков

https://www.youtube.com/watch?v=ytpolicyandsafetyen-GB

1. Заражение
восприимчивых лабораторных животных

-гибель животного

-появления
клинических симптомов

-тельца включения

2.Заражения куриных
эмбрионов (4-12 дней)

-гибель эмбриона

-появление бляшек

-РГА

3. Заражение культуре
клеток

Лабораторная диагностика вирусных инфекций

-ЦПД

-по изменению в
клетке

-бляшкообразование

-тельца включения

-феномен гемадсорбции

https://www.youtube.com/watch?v=ytpressen-GB

-цветная реакция

Микроорг
культ-ют
на иск питат ср. В завис-ти от пищевых
потребностей, среды должны содерж соотв
исходн в-ва. Усл культ-я зависят от св-в
мо. Одни растут на простых питат ср, др
на сложных, рН имеет большое значение,
среда д.б. изотоничной, опред ОВ потенциала,
опред вязкости и стерильна. Выведение
микр из различн материалов широко исп-ся
в лабораторн диагн-ке, в произв-ве вакцин,
аб.

Усл культ-я зависят от св-в.В диагн-ке
исп-ют иск пит ср, они дел-ся на основные,
диф-диагн и элективные.В больш-ве случаев
исп-ся тверд пит ср, предваоительно
разлитые на чашки Петри. Еа пов-ть ср
помещ материал и растир шпателем, пересев
изолир колонии на скшен агар приводит
к получ чист культ.

Для идент-ии изуч
призн: морфологию (в окрашен мазках или
натив препаратах) и биохим (по спос-ти
ферм-ть ув. Исп-ют бл, иммунологич,сл
(р-ию преципитации, ИФА, РИФ, РСК). Осн
пит ср:
осн качества пит ср дост кол-во пит в-в,
опред р-ия среды,с терильность,
изотоничность.При культ-ии патоген
микробов необх обеспечить метатрофн
тип пит.

Простые
пит ср
(по составу) для бакт не треб особ усл,
диф-диагн
ср(по
назначению) для изуч биохим св-в, позвол
отличить различн виды микробов, элективные
или изберательные, т.е. наиб пригодны
для разв-я опред типа микр. Универс прост
пит ср явл-ся МПА, основой для котор
сост мясн вода. (среда с агар-агаром
явл-ся тверд, поэтому явл-ся осн ср), МПБ.
Кровян агар для выявл-я гемотоксич св-в
мо, свернут сыв пригодна для выращ-я
мо, ср.Леффлера (3части сыв и 1 часть
бульона), ср пестрого ряда

Предлагаем ознакомиться:  Будет ли прок от применения Вильпрафена для лечения простатита

Наибольшее
распространение имеют однослойные
культуры клеток, которые можно разделить
на 1) первичные (первично трипсинизированные),
2) полуперевиваемые (диплоидные) и 3)
перевиваемые.

По происхождениюони классифицируются на эмбрионштьные,
опухолевые и из взрослых организмов;по морфогенезу- на фибробластные,
эпителиальные и др.

Первичныекультуры клеток – это клетки какой-либо
ткани человека или животного, которые
имеют способность расти в виде монослоя
на пластмассо­вой или стеклянной
поверхности, покрытой специальной
питательной средой. Срок жизни таких
культур ограничен. В каждом конкретном
случае их получа­ют из ткани после
механического измельчения, обработки
протеолитическими ферментами и
стандартизации количества клеток.

Лабораторная диагностика вирусных инфекций

Полуперевиваемые(илидиплоидные) культуры клеток
– клетки одного типа, способные in vitro
выдерживать до 50-100 пассажей, сохраняя
при этом свой исходный диплоидный набор
хромосом. Диплоидные штаммы фибробластов
эмбриона человека используются как для
диагностики вирусных инфек­ций, так
и при производстве вирусных вакцин.

Перевиваемыеклеточные линии характеризуются
потенциальным бес­смертием и
гетероплоидным кариотипом.

Источником
перевиваемых линий могут быть первичные
клеточные культуры (например, СОЦ, ПЭС,
ВНК-21 – из почек однодневных сирийских
хомяков; ПМС – из почки морской свинки
и др.) отдельные клетки которых
об­наруживают тенденцию к бесконечному
размножению in vitro. Совокупность изменений,
приводящих к появлению из клеток таких
особенностей, называют трансформацией,
а клетки перевиваемых тканевых культур
– трансформиро­ванными.

Другим источником
перевиваемых клеточных линий являются
злокачест­венные новообразования. В
этом случае трансформация клеток
происходит in vivo. Наиболее часто в
вирусологической практике применяются
такие линии перевиваемых клеток: HeLa –
получена из карциномы шейки матки; Нер-2
– из карциномы гортани; Детройт-6 – из
метастаза рака лёгкого в костный мозг;
RH – из почки человека.

Для культивирования
клеток необходимы питательные среды,
которые по своему назначению делятся
на ростовые и поддерживающие. В составе
росто­вых питательных сред должно
содержаться больше питательных веществ,
чтобы обеспечить активное размножение
клеток для формирования монослоя.
Поддерживающие среды должны обеспечивать
лишь переживание клеток в уже сформированном
монослое при размножении в клетке
вирусов.

https://www.youtube.com/watch?v=ytadvertiseen-GB

Широкое применение
находят стандартные синтетические
среды, напри­мер, синтетическая среда
199 и среда Игла. Независимо от назначения
все пита­тельные среды для культур
клеток конструируются на основе
сбалансированно­го солевого раствора.
Чаще всего им является раствор Хенкса.
Неотъемлемый компонент большинства
ростовых сред – сыворотка крови животных
(телячья, бычья, лошадиная), без наличия
5-10% которой размножение клеток и
форми­рование монослоя не происходит.
В состав поддерживающих сред сыворотка
не входит.

Лабораторная диагностика вирусных инфекций

Выделение
вирусов в культурах клеток и методы их
индикации.

При выделении
вирусов из различных инфекционных
материалов от больного (кровь, моча,
фекалии, слизистые отделяемые, смывы
из органов) применяют культуры клеток,
обладающие наибольшей чувствительностью
к предполагаемому вирусу. Для заражения
используют культуры в пробирках с хорошо
развитым монослоем клеток.

Перед
заражением клеток питательную среду
удаляют и в каждую пробирку вносят по
0,1-0,2 мл взвеси испытуемого материала,
предварительно обработанного антибиотиками
для уничтожения бактерий и грибов. После
30-60 мин. контакта вируса с клетками
удаляют избы­ток материала, вносят в
пробирку поддерживающую среду и оставляют
в тер­мостате до выявления признаков
размножения вируса.

1) развитие
специфической дегенерации клеток –
цитопатическое действие ви­руса
(ЦПД), которое имеет три основных типа:
кругло- или мелкоклеточная дегенерация;
образование многоядерных гигантских
клеток – симпластов; развитие очагов
клеточной пролиферации, состоящих из
нескольких слоев клеток ;

2) обнаружение
внутриклеточных включений, располагающихся
в цитоплазме и ядрах пораженных клеток;

3) положительная
реакция гамагтлютинации (РГА);

4) положительная
реакция гемадсорбции (РГАдс);

5) феномен
бляшкообразования: монослой зараженных
вирусом клеток покры­вается тонким
слоем агара с добавлением индикатора
нейтрального красно­го (фон – розовый).
При наличии вируса в клетках образуются
бесцветные зоны («бляшки») на розовом
фоне агара.

6) при отсутствии
ЦПД или ГА можно поставить реакцию
интерференции : ис­следуемая культура
повторно заражается вирусом, вызывающим
ЦПД. В по­ложительном случае ЦПД будет
отсутствовать (реакция интерференции
по­ложительная). Если в исследуемом
материале вируса не было, наблюдается
ЦПД.

24. Где в хозяйской клетке размножаются днк- и где рнк- содержащие вирусы?

  • ДНК-содержащие
    вирусы.
     Репликация
    генома у большинства ДНК-содержащих
    вирусов происходит в клеточном ядре.
    Если клетка имеет соответствующий
    рецептор на своей поверхности, эти
    вирусы проникают в клетку либо путём
    непосредственного слияния с клеточной
    мембраной (напр. герпесвирусы),
    либо — что бывает чаще — путём
    рецептор-зависимого эндоцитоза.
    Большинство ДНК-содержащих вирусов
    полностью полагаются на синтетический
    аппарат клетки-хозяина для производства
    ихДНКиРНК,
    а также последующегопроцессинга
    РНК. Однако вирусы с крупными геномами
    могут сами кодировать большую часть
    необходимых для этого белков. Геному
    вируса эукариот необходимо преодолеть
    ядерную мембрану для того, чтобы получить
    доступ к ферментам, синтезирующим ДНК
    и РНК, в случае же бактерифагов ему
    достаточно просто проникнуть в клетку.

  • РНК-содержащие
    вирусы.
     Репликация
    таких вирусов обычно происходит в
    цитоплазме. РНК-содержащие вирусы можно
    подразделить на 4 группы в зависимости
    от способа их репликации. Механизм
    репликации определяется тем, является
    ли геном вируса одноцепочечным или
    двухцепочечным, вторым важным фактором
    в случае одноцепочечного генома является
    его полярность (может ли он непосредственно
    служить матрицей для синтеза белка
    рибосомами). Все РНК-вирусы используют
    собственную РНК-репликазудля
    копирования своих геномов.

2. Фагоцитоз, классификация фагоцитирующих клеток. Основные стадии фагоцитоза, завершенный и незавершенный фагоцитоз.

Фагоцитоз
и система комплемента- вторая линия
защиты организма против микроорганизмов,
преодолевших поверхностные барьеры.
Представлены полиморфоядерными
лейкоцитами или гранулоцитами-
нейтрофилами, эозинофилами и базофилами
(клетками миелопоэтического ряда), а
также моноцитами и тканевыми макрофагами
(клетками макрофагально- моноцитарной
системы).

Стадии
фагоцитоза.

1.Активация
(усиление энергетического метаболизма).
Факторами активации и хемотаксиса
являются бактериальные продукды (ЛПС,
пептиды), компоненты комплемента (С3 и
С5), цитокины и антитела.

2.Хемотаксис.

3.Адгезия.

4.Поглощение.

5.Исход
фагоцитоза.

Завершенный
фагоцитоз- полное переваривание
микроорганизмов в клетке- фагоците.

Незавершенный
фагоцитоз- выживание и даже размножение
микроорганизмов в фагоците. Это характерно
для факультативных и особенно – облигатных
внутриклеточных паразитов.

3. Возбудители раневой анаэробной
инфекции. Виды клостридий, бактероиды.
Характеристика возбудителей газовой
гангрены, факторы патогенности.
Распространение клостридей в природе.
Патогенез газовой гангрены, лабораторная
диагностика, специфическая профилактика.

ЕТРОВИРУСЫ.
обнаружены в нач. ХХ в. Эллерманом,
Бангом, в сомат. сем. выд. в 1974 г.

стр РНК завис –
полимераза. ретро – обратная направленность
потока ген. инф-у

(от РНК к ДНК).
липидн. оболоч. 2 нить РНК. Классифик.
сем Retroviide, 1. Подсем. Oncovirinal,

род А,В,С,D.2. подс.
Spumavirinal, 3. подс. Лentivininal.

1. РНК сод-е опух-е
вирусы. 2. – синцит-е(образ.пенящую массу
в к-ре Кл.(ЦПД),

Лабораторная диагностика вирусных инфекций

для чела не патог..
3 – медленные (ВИЧ). ПАТ. вирусы для человека
т-клеточн,

лимфотр-е вирусы
человека (HTLV).

HTLV-I – т-клеточные
лейкоз

HTLV-II- при хронических
лекозах, лимфомы.

ВИЧ-1 – ВИЧ инфекция,
более благоприятн.

ВИЧ-2 – ВИЧ инф,
встречается в западной Азии.

2 вида Вич:1) при
клинических формах СПИДа. 2) более низкая
вирулентность.

ЛД. Выдел. на к.к.
идентиф-я на выявл-и вирусных Ag и At.

https://www.youtube.com/watch?v=ytabouten-GB

Билет№51

Факторы, влияющие на результаты лабораторных анализов.

Перед
выявлением вируса в клетках его
обычно отделяют от клеток хозяина путем
их разрушения с помощью многократного
замораживания и оттаивания или растирания
со стерильным песком. Полученный
вирусосодержащий материал центрифугируют
или пропускают через бактериальный
фильтр, обрабатывают антибиотиками для
деконтаминации и предотвращения
бактериального загрязнения.

Для выявления (индикации) вирусов
применяются следующие методы.

Индикация вирусов в культуре клеток
осуществляется, прежде всего, по
цитопатическому действию (ЦПД) вирусов,
сроки и характер которого зависят от
свойств вируса, проявляясь дегенеративными
изменениями клеток с последующей их
гибелью и отслаиванием от стекла (рис.
29).

гроздеобразования
(округление, увеличение и слияние клеток
с
образованием гроздевидных
скоплений, типично для аденовирусов),

Лабораторная диагностика вирусных инфекций

очаговой
деструкции (очаги
пораженных клеток
на фоне в целом сохранившегося монослоя),
характерной
для вирусов гриппа;

симпластообразования
(слияние клеток с
образованием гигантских многоядерных
клеток
в виде симпластов или синцитиев,
характерных для вирусов кори, паротита,
парагриппа, респираторно-синцитиального,
герпеса, иммунодефицита
человека).

Пролиферативный
тип ЦПД с трансформацией клеток в
злокачественные, обладающие неограниченными
потенциями к росту, способны вызывать
онкогенные вирусы.

Сроки, в течение которых наступает ЦПД,
вариабельны (например, 1-2 дня у полиовирусов,
7-14 суток у аденовирусов).

Если в
инфицированных культурах клеток ЦПД
отсутствует или слабо
выражено, проводят «слепые пассажи»,
т.е. заражают культуральной
жидкостью новые культуры клеток.

Рис.
29. Культура клеток почек обезьян (а –
незараженная, б – цитопатическое
действие вируса) х200

Индикация
вирусов с помощью реакции гемадсорбции
(РГад). Сущность
этой реакции заключается в способности
эритроцитов человека или животных
адсорбироваться
на
поверхности клеток, инфицированных
рядом вирусов (например, орто и
парамиксовирусов и др.) в ранние сроки
их репродукции (до
развития ЦПД) в результате действия
гемагглютининов – гликопротеидов,
входящих в состав
суперкапсида
вируса.

Для
постановки РГад в культуру клеток
добавляют
0,2 мл 0,5%-й
взвеси эритроцитов, выдерживают 15-20
мин при температуре 40,
200
или 370
С в зависимости от свойств вируса, после
чего взвесь эритроцитов удаляют и
производят учет реакции под малым
увеличе­нием
микроскопа по скоплению эритроцитов
на отдельных клетках или на всем монослое.

Индикация
вирусов по цветной пробе.Принцип
метода основан на определении кислых
продуктов метаболизма, накаливающихся
в клетке в процессе ее жизнедеятельности
с помощью индикатора фенолового красного,
меняющего свой цвет с красного в щелочной
среде на оранжево-желтый в кислой среде.
При
заражении культуры клеток
вирусами, вызывающими ЦПД (например,
аденовирусы, энтеровирусы и др.),
ме­таболизм
клеток подавляется, рН среды не меняется
и она остается
окрашенной в красный цвет.

Индикация
вирусов по внутриклеточным включениям.
Репродукция
некоторых вирусов (оспы, герпеса,
бешенства) приводит к образованию внутриклеточных
включений,
локализующихся в
ци­топлазме
или в ядре клеток и представляющих
собой скопления вируса (или его антигенов).
Включения
выявляют путем световой микроскопии
культур клеток, окрашенных
по Романовскому- Гимзе или другими
методами,
а также с помощью прямого флюорохромирования
(например акридиновым оранжевым) с
последующей микроскопией препаратов
в люминесцентном микроскопе.

Индикация
вирусов с помощью прямой РИФ – выявлениевирусных
антигенов, находящихся в инфицированной
клетке культуры ткани, с помощью антител
диа­гностической
иммунной сыворотки, специфических
иммуноглобулинов или моноклональных
анти­тел,
меченых флюорохромом, обычно флюоресцеином
(рис. 30).

Индикация
вирусов с помощью электронно-микроскопического
метода (ЭММ) применяется,
в основном, в научных исследованиях.
Материал
для ЭММ концентрируют различными
методами (ультрацентрифугирование,
хроматография
на колонках, адсорбцией с помощью
специальных сор­бентов
или антител – для метода иммунной
электронной микроскопии).

Рис.
30. Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) –
выявление вирус-специфических антигенов.
х900

Предлагаем ознакомиться:  Чем лечить простату у мужчин лекарства

Индикация
вирусовпо
образованию бляшек –
очагов
разрушенных вирусом монослоя культуры
клеток под ага­ровым покрытием.
Количество бляшек отражает инфекционную
активность вируса.

Для
постановки этой пробы вирусную суспензию
в разных разведениях вносят в культуры
ткани, находящиеся в плоских сосудах,
после чего монослой клеток заливают
гелем (слой агара или бентонита с
индикатором нейтральным красным). Время
бляшкообразования для большинства
вирусов, обладающих ЦПД, варьирует от
36
до 48 ч.

Индикация
вирусов в куриных эмбрионах. Зараженные
РКЭ инкубируют в
термостате при 35- 370
С в течение 48 -72 ч.,
после чего производят их вскрытие,
амниотическую
и аллантоисную
жидкость отсасывают шприцем, а оболочки
и эмбрион извлекают
и помещают в стерильные чашки Петри.

При
репродукции некоторых вирусов
(натуральной
оспы, осповакцины, простого герпеса) на
ХАО кури­ных
эмбрионах появляются характерные бляшки
– беловатые пятна диаметром 1-2
мм, количество которых соответствует
числу инфекционных ча­стиц.

В аллантоисной и амниотической
жидкости зараженных эмбрионов ряд
вирусов (например, ортомиксовирусы,
парамиксовирусы, аденовирусы и т.д.)
может быть выявлен с помощью реакция
гемагглютинации (РГА).
Принцип реакции состоит в способности
гемагглютининов -поверхностных
вирусных структур гликопротеидной
при­роды
этих вирусов
склеивать
(агглютинировать) эритроциты опреде­ленных
видов животных, птиц или человека. РГА
не относится к иммунологи­ческим
реакциям, поскольку в ее основе отсутствует
взаимодействие АГ и AT.

РГА
ставят обычно в пробирках или в специальных
полистироловых план­шетах.
Для этого гото­вят
двукратные разведения вирусосодержащего
материала на ФР в
объеме 0,5 мл. Во все пробирки добав­ляют
0,5 мл 1% взвеси эритроцитов. В контроле
к 0,5 мл ФР добавляют аналогичный объем
взвеси эритроцитов.

Пробы учитывают через 30-60 мин инкубации
при комнатной температуре, в термостате
при 370
С
или в холодильнике при 40
С.
Положительная реакция характеризуется
выпадением осадка эритроцитов в виде
«зонтика» с фестончатыми краями; при
отрицательном результате эритроциты
оседают в виде компактного осадка
(«пуговки» – рис. 31).

Гемагглютинационный
титр (макси­мальное
разведение вирусосодержащей жидкости,
вызывающее аг­глютинацию
эритроцитов – одна
гемагглютинирующая единица вируса,1
ГЕ)
соответствует
концентрации вируса. Агглютинацию
эритроцитов могут вызывать также
некоторые бактерии
(стафилококки, эшерихии, сальмо­неллы,
шигеллы, холерный вибрион Эль-Тор), что
необходимо учитывать при трактовке
результатов РГА при исследовании
вирус-содержащего материала,
загрязненного бактериальной микрофлорой.

Определение
титра вирусов можно проводить также на
хорионаллантоисной
оболочке.Для
этого в лунки стерильных полистироловых
пластин помещают кусочки скорлупы
11-12-дневного куриного эмбриона с
неповрежден­ной
ХАО, добавляют вирусосодержащую жидкость
в десятикратных
разведениях на буфере, накрывают пластины
фоль­гой
и инкубируют при 35-37 0
С в течение 24-72 часов.

Рис. 31. Реакция гемагглютинации для
выявления вируса гриппа в хорион-аллантоисной
жидкости куриного эмбриона.

Индикация
вирусов в организме лабораторных
животных находится
в зависимости от вируса и вида
чувствительного лабораторного животного,
будет описана в лабораторной диагностике
конкретных вирусных инфекций.

Суспензия фекалий,
обработанная антибиотиками, осветлённая
центрифугированием

Заражение мышей
Заражение культур клеток

Параличи, гибель
Пикорновирусный
тип ЦПД
Реовирусный тип ЦПД
Аденовирусный
тип ЦПД

РН, РСК

РСК, РН по цветной
пробе
ИФ, РН, РТГА
РТГА, РСК, РН

Коксаки А, В, ротавирусы

энтеровирусы
аденовирусы
ротавирусы

1 группа-
Аномальные нуклеозиды – аналоги
предшественников нуклеи­нового
обмена, ингибируют функции вирусных
полимераз или включаются в цепочку
нуклеиновой кислоты, делают её
нефункциональной.

Аналог пиримидина
– йоддезоксиуридин применяется для
лечения гер­петических кератитов,
кожного герпеса и цитомегалии. Пуриновые
аналоги – видорабид применяют для лечения
герпетических энцефалитов, ветряной
оспы и опоясывающего герпеса. Ацикловир
(зовиракс) – используют также для лече­ния
разных видов герпетической инфекции.

27. Механизмы противовирусного действия интрферона.

РГА-гемаглютинация,
культура Кл вирус эритроциты. Если вирус
есть то адсорбируются и не смывается.
Цв проба: культура Кл вирус индикатор.
Если нет ЦПД –желтый цвет, есть
вирус-красный цвет.

Билет№51

ИФ-альфа, продуцируется
лейкоцитами, противовирусным,
антипролиферативным, противоопухолевым
действием. Нарушает репродукцию вирусов,
активируя в клетки ингибиторов релекации
вируса.

ИФ-бэта, продуцируется
фибробластами, противоопухолевым и
противовирусным действием.

ИФ-гамма, продукт
Т – хелперов, противовирусное действия.
Влияет на рост клеток, активирует
макрофаги, повышает продукцию ИЛ-1.

основные
формы иммунитета-
видовой
(врожденный) и приобретенный –
иммунитет зависит от согласованной
деятельности пяти основных систем :
макрофагов, комплемента, интерферонов,
Т- и В- лимфоцитов, главной системы
гистосовместимости Приобретенный
иммунитет может быть естественный
(результат встречи с возбудителем) и
искусственный
(иммунизация), активный
(вырабатываемый)
и пассивный
(получаемый),
стерильный
(без наличия возбудителя) и
нестерильный
(существующий в присутствии возбудителя
в организме), гуморальный
и
клеточный, системный и
местный, по
направленности- антибактериальный,
антивирусный, антитоксический,
противоопухолевый, антитрансплантационный.

Клеточный иммунный
ответ – это
функция Т-лим­фоцитов. эффекторных
кле­ток – Т -киллеров, способных
уничтожать клетки, Т-хелперы усиливают
иммунный ответ, Т-супрессоры оказывают
противоположное влияние.

Гуморальный
иммунитет
– это функция В-клеток. Т – хелперы,
пере­дают ее В-лимфоцитам. В-лимфоциты
формируют клон антител продуцирующих
клеток. При этом про­исходит
преобразование В-клеток в плазматические
клетки, секретирующие иммуноглобулины
(антитела), которые имеют специфическую
активность про­тив внедрившегося
антигена.

АГ – АТ, который запускает в
действие неспецифичеекие ме­ханизмы
защитной реакции, активиру­ют систему
комплемента. Взаимодействие комплекса
АГ – АТ с тучными клетками приводит к
дегрануляции и выделению медиаторов
воспаления – гистамина и серотонина.
При низкой дозе антигена развивается
иммунологи­ческая толерантность. При
этом антиген распознает­ся, НО в
результате этого не происходит ни
продукции клеток, ни развития гуморального
иммунного ответа.

Лабораторная диагностика вирусных инфекций

Вакцины
– взвесь бактерий или микроо-мов или
компонентов, искуственный активный
им-т. 1) живая 2) инактивир. – корпускуляр.
3) искуственая 4) рекомбинант. –
генно-инженер. 5) убитые 6) ассоциирован.
Для профилактики.

Живые вакцины
– невирулентные, но иммуногенные штаммы,
размнажаются в организме, получаются
при хим., физич. обработкой, долгим
культивированием. Преимущ.: создают
напряженный им-т, однократное введение.
Недостки: сложно хранить, нельзя с
дезинфицирующеми средствами, побочное
действия. Для профилактики вирусов и
бактерий. (грипп, корь, паротит)

Неживые вакцины
– корпускуляр.
(типич. штаммы, инактивир. физико-хим.
фак-торами) – брюшнотифоз., холер. Хим.
(иммуноген. компоненты бактерий, извлечен.
хим. методами, – Аг защитные без балластных
б-ков) – Тавte-тиф,
паратиф, столбняк.

Искус. вакцины
– Аг-детерминанты, соед. с полимерами.
Липосомаль. вакцины – Аг в составе
липосом, прикрепл. к иммунокомпетент.
кл. Субединич. вакцины – наиб. иммуноген.
Аг. Генно-инж. (рекомбинант.) – ген синтеза
протективного Аг вводят в кл. б., идет
синтез Аг 
выработка Ат. Ассоциирован. вакцины –
неск. Аг (Таbte
– Аг адсорбированы на Al(OH)3).

Анатоксины
– экзотоксин, обезвреж. формалином и
выдержан. при t=37°
1 мес., не ядовит, но иммуногенен, очищ.
от балластных б-ков, адсорбируют на
Al(OH)3.
Искус. актив. антитоксич. им-т. АКДС –
убит. б. коклюша дифтерий. и столбняч.
анатоксины. Для проф-ки.

Противовирусное
действие интерферонов проявляется их
способностиподавляь внутриклеточное
размножение широкого круга ДНК- и РНК-
вирусов. Интерферон не взаимодействует
сенпосредственно с вирусом, он не
припятствует адсорбции вируса на клетк
и его проникновению в клетку. Антивирусное
действие интерыерона не связано с
синтезон какого-то нового белка, а
проявляется в повышенной активности
ряда ключевых ферментов клеточного
обмена веществ.

Один
из возможных механизмов антивирусной
активнсти интерферна залючается в
том.что он увеличивает продукцию
протеинкиназы, которая фосфолирует
один из факторов инициации трансляции
и ингибирует синтез белка. Другой
механизм сводится к тому.что под влиянием
интерферона накапливается
олигоаденилатсинтетаза, приводящая к
образованию 2,5-олигоадениловой
кислоты.Последняя активирует клеточную
эндонуклеазу, которая разрушает молекулы
РНК, в том числе и мРНК.

3. Реровирусы, таксономия, их общая характеристика, особенности взаимодействия с клеткой, механизм злокачественной трансформации клетки. Понятие об онкогене. Роль этих вирусов в патологии человека.

Билет№51

Протоонкоген
– это группа нормальных генов клетки,
оказывающая стимулирующее влияние на
процессы клеточного деления, посредством
специфических белков.

Лабораторная диагностика вирусных инфекций

В
результате мутации протоонкогены
переходят в онкогены.

Онкогены
– гены обуславливающие превращение
нормальных клеток эукариот на
злокачественные при участии онкобелков.
Часто наодятся в ДНК-и РНК- вирусов, и в
геноме опухолевых клеток.

31. Что такое трансдукция, м-м

Трансдукция (от лат.transductio —
перемещение) — процесс
переносабактериальнойДНКиз
одной клетки в другуюбактериофагом.
Общая трансдукция используется в
генетике бактерий длякартирования
геномаи конструированияштаммов.
К трансдукции способны как умеренные
фаги, так и вирулентные, последние,
однако, уничтожают популяцию бактерий,
поэтому трансдукция с их помощью не
имеет большого значения ни в природе,
ни при проведении исследований.

Неспецифическая-
случайный перенос фрагментов ДНК от
одной бактерии к другой

Спец-я
– осущ. Только фагами, облад способностью
включаться в строго опред участки
хромосомы бактер кл-ки и трансдуцировать
опр гены

Вирусные заболевания, их особенности

Билет№51

Билет№28

Лабораторная диагностика вирусных инфекций

Вирус гепатита
С

Вирус гепатита
Е

Билет№29

Плазмиды:
несут 2 ф-ии: регулят и кодирующ. Регулят
сост в компенсации нарушений метаб-ма
ДНК хозяина. Кодир ф-ия сост во внесении
в бакт кл нов инф-ии, осн факт насл, явл
спос бесконечно долг сущ и самост
воспроизводству. Жизненно важн св-в не
кодир, но м привносить в кл выгодн для
нее св-ва.

Бывают конъюгативные и
неконъюгативные виды:1)R-плазмиды-устойч
к а/б и химиопрепар 2)плазмиды
патогенности-tox,hly 3)плазмиды резистентности
4)колициногенности. Бактериоцин-в-во
белков природы, синтез микр кл при
наличии в ней опред плазмиды, кл-продуцент
гибнет. В-во предназначено для уничтож
родств групп бакт 5)плазмиды
биодеградации-разруш неприродн соед
6)плазмиды фертильности, плодовитости-обеспеч
синтез половых ворсинок

Билет№35

1) палочки – перетрихи

2) Грам-

3) факультативные
анаэробы

4) оксидаза (-)

5) каталаза ( )

Свободноживущие
непатогенные, непатогенные Citrobacter,
живущие в кишечнике человека: Escherichia,
Salmonella, патогенные для человека и животных:
энтеропатогенные кишечные палочки
(ЭПКП).Наиболее молодыми в процессе
эволюции являются Shigella, они патогенны
только для человека, могут быть
внутриклеточными паразитами.

Билет№36

Билет№37

Строение генома
б. Фрагмент
ДНК или РНК, контролир. синтез одного
б-ка, – ген. Гены: структур. и регулятор.
Все в хро-ме. Плазмиды – внехром. ген.
эл-ты. Изменч-ть:
наследственная (генотипич), модификационная.
Мутации:
происхожде-ние (спонтанн., индуцир.),
число мутировавших генов (геннные –
выпадения, вставки, замены; хромосомные
– делеции, инверсии, дупликации),

Лабораторная диагностика вирусных инфекций

по фенотип.
последствиям
(потеря признака или восст-е – генотипа
или фено-), по фенотип. проявлениям
(утрата клет. стенки, жгутиков,
резистентность к А/Б и пр.)

Плазмиды б.
– внехромосомные необязательные
генетич. эл-ты, способны к не-зависимой
репликации, определяют устойч-ть к
А/Б,синтез токсинов, гемолизинов, бывают
криптические (скрытые), конъюгативные
(тр-т своей ДНК в др. клетку), неконъюг.,
колициногенные (потенциально летальные
для б.). Плазмиды 
жизне-способность б. в организме. Для
биопрепаратов в проф-ке и лечении
инфекций

Бактериальная
хромосома – ДНК
бактерии, по аналогиис эукариотами.

Транпозоны –
Фрагмен ДНК, который может перемещать
информацию с хромосомы бактерии или на
оборот. Также может кодировать информации
и выполнять регуляторную функцию.

Предлагаем ознакомиться:  Самое эффективное лекарство от хронического простатита

Внеш об.нет. Ад.
группоспец. ком. связ. – общ, типоспец. –
индив. в РН. К культ. кл.

человека и обезьян,
имеют рец, адсорб. данный вирус. Пат. по
степени патоген-ти для

новорожденных на
2 группы – коксаки А (пор. скел. м., разв.
парал), – кокс. В (пор. ЦНС,

спазтич .). А – 23
серот., В – 6 серот. Вир. обл. гемаггл. акт.
ЕСНО – 30 серот. отлич по

Лабораторная диагностика вирусных инфекций

Ад св-м. Многие
гемагл. свойствами. ЛД. Мат – фекалии,
носоглот. смыв, кровь, спномозговая

жидкость, вир. выд
в кул. кл. и на новор. мышах. Идент – РН на
соотв. кул., РТГА

(для энтеритов,
облад. гемаггл. ант. Спец. проф. Отеч.
вакц. против энтеровируса серотипа

71. У коксаки проф.
вакцинами отсутствует. Леч. Симптомат.

Билет№44

Билет№46

Лабораторная диагностика вирусных инфекций

Билет№47

1) вирусные инфекции,

1. Вирусные инфекции
– широко распространённые. Их удельный
вес в струк­туре инфекционной
заболеваемости может составить 60-80%.

2. Внутриклеточное
размножение вирусов приводит к массовой
гибели клеток организма.

3. Размножение
некоторых вирусов (ВИЧ, вирусы кори,
гепатита В, С) в клет­ках иммунной
системы приводит к развитию иммунодефицитного
состояния.

4. Способность
некоторых вирусов интегрироваться с
геномом клетки (ВИЧ, вирус гепатита В,
онкогенные РНК-содержащие вирусы).

5. Некоторые вирусы
(краснухи, цитомегалии) обладают
тератогенным дейст­вием.

6. Инфекционные
вирусы могут провоцировать развитие
опухолей (аденовирусы, герпесвирусы,
вирусы гепатитов В, С, G).

Лабораторная диагностика вирусных инфекций

7. Вирусы могут
вызывать медленные инфекции (ВИЧ, вирусы
кори, бешенст­ва, гепатита В, герпеса
и др.).

8. Иммунопрофилактика
многих вирусных инфекций отсутствует.

9. Диагностика
вирусных заболеваний применяется не в
каждом конкретном случае из-за массовости
этих заболеваний.

10.До настоящего
времени недостаточно эффективных
средств для лечения ви­русных
заболеваний.

Плазмиды-
наипростейшие живые существа, лишенные
белковой оболочки и представленные
только совокупностью организованных
генов, определяющих их специфические
свойства, наследственность, а также
дополнительные признаки, которыми они
наделяют клетку носителя.

Плазмиды
подразделяются на конъюгативные , т.е.
способные к самопереносу, и неконъюгативные,
перенос которых осуществляется
конъюгативными плазмидами. Передача
плазмид среди бактерий происходит как
по вертикали, так и по горизонтали,
обеспечивая их эпидемическое
распространение.

Классификация вирусных инфекций Уровень клетки

продуктивная
абортивная
Интеграция полного
генома
Интеграция части генома

острая
хроническая
острая

Лабораторная диагностика вирусных инфекций

Неоплатическая
трансформация
Отсутстие
трансформации

цитолитическая
нецитолитическая

Лимфоциты явл.
производными стволовой клетки костного
мозга. В результате пролиферации и
дифференцировки стволовых клеток
формируются 2 группы лимфоцитов: Т и В.
Т-лимфоциты
созревают и дифференцируются в тимусе
и осуществляют 2 функции – регуляторную
и эффекторную. Регуляторные клетки
обеспечивают развитие иммунного ответа
и его дальнейшее течение.

Эффекторные
осуществляют эффект иммунологической
реакции в форме цитолиза клеточных
структур, к Ag которох возникла
иммунологическая реакция. Т-лимфоциты
не имеют рецепторов на Ig, но есть рецепторы
на полноценный Ag. Способны воспринимать
гормоны (кортикоиды), обеспечивают
клеточный иммунитет.

После контакта с
Ag образуются Т-киллеры (уничтожают
пораженные вирусом клетки без участия
At и комплемента), Т-супрессоры (подавляют
синтез At в плазмоцитах и пролиферацию
плазмоцитов), Т-хелперы (обеспечивают
взаимодействие макрофагов, Т- и
В-лимфоцитов в процессе иммунного
ответа), Т-клетки памяти (обеспечивают
вторичный иммунологический ответ).

В-лимфоциты
выполняют
в организме продукцию At и участвуют в
представлении Ag Т-лимфоцитам. Происходят
от стволовой клетки, созревают в костном
мозге. Покрыты рецепторами Ig, воспринимают
неполноценный Ag, не способны воспринимать
гормоны, обеспечивают гуморальный
иммунитет. Ф-ии: синтез At, участвуют во
вторичном иммунном ответе.

Стадии
фагоцитоза.

Лабораторная диагностика вирусных инфекций

2.Хемотаксис.

3.Адгезия.

4.Поглощение.

2) Грам-

4) оксидаза (-)

5) каталаза ( )

Билет№36

2. Роль организма хозяина в инфекционном
процессе: значение наследственного
фактора, пола, возраста, состояния
эндокринной и нервной систем. Влияние
приподных и социальных условий жизни
человека на возникновение, развитие и
исход инфекционных болезней.

Лабораторная диагностика вирусных инфекций

F-плазмиды
Донорные
функции

R-плазмиды
Устойчивость
к лекарственным препаратам

Col-плазмиды
Синтез
колицинов

Ent-плазмиды
Синтез
энтеротоксинов и факторов адгезии

Hly-плазмиды
Синтез
гемолизинов

Биодегративные
плазмиды Разрушение
различных органических соединений

1. Споры, капсулы, ворсинки, жгутики. Их строение, химический состав, функции, методы выявления.

Капсула
полисахаридн. природы. образ. Гр-.
Микрокапсула- тонк слизист слой, покрыв
бакт кл, предохр от высых. Макро- есть
не у всех, слизист слой, это плотное
слизеподобн в-во, образ микробами при
попадании в макроорг. Ф-ции:
.защита
от фагоцитоз, в-во капсулы оказ токсическ
действ-е, облад антиген св-вами, капсула
как морф признак ряда микробов. Выявить
можно при окраске по Бури-Гинсу.

Жгутики-органоиды
движения, прикр-ся к баз. мембр,.монотрих-1,
лофотрих -пучок на полюсе, амфитирих-
по пучку на каждом полюсе, по всей пов-ти-
перитрих. Сост из сократит белка
флагеллина. нескольк .кажд прикрепл к
кл с помощью базал тельца. Движ- вращат,
сокпатит. Оказ антиген действ на орг-зм
чел.

Пили-выросты
ЦМ. Очень тонкие полые внутри белков
нити, не явл органоидами движ, чаще для
прикрепл-я к тк. орг-ма, уч-ют в колониз-ии.
Сущ 2 типа пилей 1) общ назнач- рецепт,
способст адгезии- тропизм, 2)половые
(конъюгативные). Образ полов ворсинок
обусл внехромосомн фактором наследств-F

Споры
-некот
бакт спос образ споры (6ациллы, клостридии).
Кажд бакт спос образ только 1 спору.
Образ при попад в неблагопр среду, т.о.
это способ сохр вида. Может распол
центрально, субтерминально и терминально.
М б маленьк. и крупн Выявл по Ожешко.
Можно по Граму-спора не окраш, а на фоне
окраш формы видна.

Микрофлора
новорожд:
до рождения орг-м стерилен. В эмбрион
периоде иммуных мех-мов защиты нет.
Сущ-ет 2 критич момента в процессе
формиров кишечного микробоценоза: 1)
при рождении, когда в течение первых
суток начинается колонизация стерильного
киш-ка 2) когда ребенка отлуч-ся от
грудного вскармливания.

В ходе родов
кожа ребенка впервые соприкас-ся с
микрофлорой родов путей матери, воздухом,
вследствие этого микрофлора киш-ка
предст ассоциацией аэробов. К 4-5 дню
видовой состав фекальной микрофлоры
стан-ся более разнообразным, но еще
доминируют аэробы. Дальнейш формиров-е
аутомикрофлоры ЖКТ зависит от типа
вскармливания.

Бактериофаги
(от
бактерии и греч. phagos — пожиратель;
буквально — пожиратели бактерий), фаги,
бактериальные вирусы, вызывающие
разрушение (лизис) бактерий и других
микроорганизмов. Б. размножаются в
клетках, лизируют их и переходят в др.,
как правило, молодые, растущие клетки.

Строение
и химический состав.

Б.
состоят из головки округлой, гексагональной
или палочковидной формы диаметром
45—140 нм и отростка толщиной 10—40 и длиной
100—200 нм (рис.). Другие Б. не имеют отростка;
одни из них округлы, другие — нитевидны,
размером 8х800 нм. Содержимое головки
состоит преимущественно из дезоксирибону
клейновой кислоты (ДНК) (длина её нити
во много раз превышает размер головки
и достигает 60—70 мкм, эта нить плотно
скручена в головке) или рибонуклеиновой
кислоты (РНК) и небольшого количества
(около 3%) белка и некоторых других
веществ.

Отросток имеет вид полой трубки,
окруженной чехлом, содержащим
сократительные белки, подобные мышечным.
У ряда Б. чехол способен сокращаться,
обнажая часть стержня. На конце отростка
у многих Б. имеется базальная пластинка
с несколькими шиловидными или другие
формы выступами. От пластинки отходят
тонкие длинные нити, которые способствуют
прикреплению фага к бактерии.

Оболочки
головки и отростка состоят из белков.
Общее количество белка в частице фага
50—60% , нуклеиновых кислот — 40—50% . Каждый
Б. обладает специфическими антигенными
свойствами, отличными от антигенов
бактерии-хозяина и других фагов. Имеются
антигены, общие для ряда фагов (особенно
содержащих РНК). Б.

Лабораторная диагностика вирусных инфекций

делят на вирулентные,
вызывающие лизис клетки с образованием
новых частиц, и умеренные (симбиотические),
которые адсорбируются клеткой и проникают
в неё, но лизиса не вызывают, а остаются
в клетке в латентной (скрытой) неинфекционной
форме (профаг). Культуры, содержащие
латентный фаг, называются лизогенными.

Лизогения передаётся потомству бактерии.
Лизогенная культура может содержать
2—3 и более фагов; она, как правило,
устойчива против находящихся в ней
фагов (лишь небольшая часть клеток
лизируется и освобождает зрелые фаги).
Воздействуя на лизогенную культуру
ультрафиолетовыми или рентгеновскими
лучами, перекисью водорода и некоторыми
другими веществами, можно значительно
увеличить количество клеток, освобождающих
фаг (т. н. индукция Б.).

Лизогения широко
распространена среди всех видов бактерий
и актиномицетов. В ряде случаев многие
свойства лизогенной культуры (токсичность,
подвижность бактерий и др.) зависят от
наличия в ней определённых профагов.
Описано много мутаций Б., сопровождающихся
изменением их литической активности,
строения частиц и “колоний”,
устойчивости против неблагоприятных
воздействий и другие свойств. Б.

1. Методы титрирования вирусов (рга, цветная проба). Компоненты реакции, их механизмы.

В
основу р-ии положено то обстоятельство
, что происходить в процессе размножения
и роста клеток в питательной среде
накапливаются кислые продукты обмена
веществ , снижающие pH
среды. В ткани, зараженной вирусом,
наступает их дегенерация клеток , в силу
чего подавляется их метаболизм и не
происходит изменений pH
среды.

Для выявления этих изменений в
пит среду добавляют индикатор феноловый
красный. При pH
выше 7 индикатор красный, при pH
7 – оранжевый и при pH
ниже 7 – желтый. Если клетки не заражены
вирусом ( или он нейтрализован специфической
сывороткой), pH
пит среда сдвигается в кислую сторону
, и она становится желтой.

15)Сущность метода бляшек.

Предложен
Дюльбекко для получения изолированных
колоний вируса. В основе лежит появление
монослое зараженных вирусом клеток
обесцвеченных участков, состоящих из
дегенерированных клеток. Эти участки,
получившие название бляшек , представляют
собой колонии вируса, образующегося из
одной вирусной частицы.

Метод заключается
в том что в специальном флаконе выращивают
на стенке монослой клеток, затем удаляют
пит. Среду. Клетки заражают вирусом и
заливают агаром, содержащим индикатор
нейтральный красный. Там, где происходит
рост клеток, среда изменится в кислую
сторону и индикатор окрасится в розовый
цвет.

16)Сущность р-ии гегглютинации для обнаруживания вирусов.

Лабораторная диагностика вирусных инфекций

Аллантоисную
жидкость проверяют на содержания вируса
путем агглютинации куриных эритроцитов
на стекле ( и в пробирках – титрование
вируса). Для постановки р-ии на стекле
к какпле вируссодержащего материала
добавляют одну каплю 5%-ной взвеси
эритроцитов. Реакция проходит в течение
5 мин.

Реакция
торможения гемагглютинации (РГТА) может
быть использована для определения типа
вируса или типа и титра антител. Для
определения типа вирусов на предметное
стекло наносят по одной капле
вируссодержащего материала (кол-во
капель должно соответствовать кол-ву
сывороток). В приготовленные капли
последовательно вносят по одной капле
типовых сывороток.

https://www.youtube.com/watch?v=ytcreatorsen-GB

Контролем служит
физиологический р-р и норм сыворотка.Затем
в каждую каплю вносят по одной капле
5%- ной взвеси эритроцитов. Результат
регистрируют через 5 мин.При соответствии
вируса типу сыворотки антитела связывают
гемагглютин вируса и гемагглютинация
не наступает (РГТА положительная). Эта
реакция может быть поставлена и в
пробирках с целью титрования вируса
или антител(антигемагглютинов)

Ссылка на основную публикацию
Adblock detector